МИКРОБИОЛОГИЯ
ХИМИЯ
Главная О компании Партнеры Контакты Новости
МикроБио
МикроБио

(495) 221-20-26
E-mail
Пароль регистрация
напомнить пароль


МИКРОБИОЛОГИЯ » 3М Пищевая безопасность» 3M Molecular Detection System - 3М Система молекулярного анализа » Статья: "Сравнительная оценка 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) со стандартными методами исследования (DIN EN ISO) по выявлению Listeria monocytogenes и Salmonella enteritidis"

Статья: "Сравнительная оценка 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) со стандартными методами исследования (DIN EN ISO) по выявлению Listeria monocytogenes и Salmonella enteritidis"



Сравнительная оценка 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) со стандартными методами исследования (DIN EN ISO) по выявлению Listeria monocytogenes и Salmonella enteritidis 

Pfannebecker J., Becker B.
Университет прикладных наук, Институт пищевых технологий, Lemgo, Германия



В исследовании представлены результаты оценки молекулярного метода обнаружения патогенов в пищевых продуктах с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) в сравнении со стандартными методами выявления Salmonella enteritidis (ISO 6579) и Listeria monocytogenes (ISO 11290-1). Основой молекулярного метода 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) является сочетание методик изотермической амплификации ДНК и биолюминесцентной детекции после этапа обогащения микроорганизмов. Использование изотермической амплификации ДНК в комбинации с биолюминесцетной детекцией обеспечивает высокую чувствительность метода. Общее время анализа на 3М Системе молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection Systerm) составляет 75 мин, время обогащения образца – 18-48 ч. Общее количество естественно и искусственно загрязненных сальмонеллами и листериями образцов составило 155 (мясо, деликатесы, специи, какао-порошок, сухое молоко). За исключением анализа смеси специй, никаких различий по результатам анализа метода с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) и стандартными методиками не выявлено. 

Введение
3М Система молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) – это система молекулярного обнаружения патогенов - Salmonella, Listeria monocytogenes, E.coli О157:Н7. Система разработана для выявления бактерий в различных пищевых продуктах, таких как мясо, полуфабрикаты, готовая продукция, фрукты, овощи, корма для животных и образцы смывов с поверхности. В данном исследовании приведены результаты выявления патогенов в образцах мяса, деликатесов, специй, сухого молока и какао-порошка с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System).


Материалы и методы
155 образцов (72 естественно и 83 искусственно (102 КОЕ/г) загрязненных патогенами) исследовались на содержание Salmonella enteritidis (DIN EN ISO 6579) и Listeria monocytogenes (DIN EN ISO 11290-1) – Табл. 1.

Таблица 1. Количество образцов продуктов, исследованных на наличие патогенов 

Продукты

Salmonella

Listeria

Мясо птицы

16 (3)*

15 (3)

Маринованное мясо птицы

4

4

Специи (смесь специй)

25 (16)

25 (16)

Деликатесы

24 (14)

24 (14)

Мясной фарш

4 (3)

4 (3)

Сухое молоко

2 (2)

3 (3)

Какао-порошок

3 (3)

3 (3)

Количество образцов

77 (41)

78 (42)

Общее количество анализов

174

172

*В скобках указано количество искусственно загрязненных образцов




Обогащение образцов, а также анализ на 3М Системе молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) выполняли в двух повторностях. После этапа обогащения (18 ч) образцы анализируются на автоматическом устройстве в реальном времени в течение 75 минут. Прибор прост в эксплуатации, подготовка образца включает всего несколько этапов (рис. 2).



3М Система молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System), методика:

1) Обогащение образца. Образец продукта + обогатительный бульон (1:10), инкубировать при 37 оС, 18-48 ч.
2) Лизис клеток. Внести 20 мкл обогащенного образца в пробирку для лизиса, нагреть при 100оС 15 мин, охладить 10 мин, встряхнуть 3-5 раз, оставить на 5 мин.
3) Гидратирование реагентов. Внести 20 мкл лизата в реагентную пробирку с лиофилизованными реактивами.
4) Амплификация и детекция. Поместить пробирки в прибор и нажать кнопку «старт»; продолжительность амплификации 75 мин. Результаты в виде цветных кривых отображаются на экране в режиме реального времени.

Общее время исследования сальмонелл молекулярным методом с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) составляет менее 20 ч, что в 4,5 раза быстрее по сравнению с классическим методом (DIN EN ISO) (90-96 ч).



Результаты
Опыты с искусственно зараженными образцами показали, что даже при низком содержании клеток (102 КОЕ/г) при 18 ч обогащении положительный результат регистрируется уже через 20-30 мин после начала амплификации (рис.3). Каких-либо различий в выявлении сальмонелл и листерий в мясе, салатах, сухом молоке и какао-порошке при сравнении результатов 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) и классического метода (DIN EN ISO) не выявлено. Различия между методами выявлены при исследовании смеси специй (табл. 2).


 

Продукт

Salmonella

Listeria

Кол-во анализов

Отклонение MDS+
ISO-

Отклонение  MDS-
ISO+

Кол-во анализов

Отклонение MDS+
ISO-

Отклонение  MDS-
ISO+

Мясо птицы

28

0

0

30

0

0

Маринованное мясо

8

0

0

8

0

0

Специи (смесь специй)

37

0

2

37

1

3

Салаты

34

0

0

34

0

0

Мясной фарш

8

0

0

8

0

0

Сухое молоко

2

0

0

1

0

0

Какао-порошок

3

0

0

4

0

0

Всего:

120

0

2

122

1

3



При анализе смеси специй (сельдерей, горчица, перец) с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) (в сравнении с ISO) получили ложноотрицательный результат. В дальнейшем при анализе специй после разбавления образцов (1:100) и последующем проведении этапа обогащения все загрязненные образцы (102 КОЕ/г) были оценены как положительные (данные не приведены). 

В опытах по выявлению предела обнаружения бактерий на 3М Системе молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) в мясе и деликатесах показано, что выявление микроорганизмов в этих продуктах без этапа обогащения возможно лишь при исходной концентрации бактерий свыше 105  КОЕ/г. Таким образом, достоверные результаты по выявлению патогенов можно получить лишь после 18 ч этапа обогащения образцов.

Результаты с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) молекулярного обнаружения патогенов сравнивали со стандартными методами DIN EN ISO. Точность полученных результатов в опытах с сальмонеллой составила 98%, специфичность 100% , а чувствительность 96%; для листерии, точность - 96%, специфичность – 98% и чувствительность - 95%. 

Заключение
При сравнении со стандартным методом DIN EN ISO молекулярный метод с использованием 3М Системы молекулярного анализа (3M™ Molecular Detection System) показал достоверные результаты при сокращении времени исследования при анализе Listeria monocytogenes и Salmonella enteritidis. Ложноотрицательные результаты при анализе специй можно избежать, изменив этап подготовки образцов. 


МикроБио, (495) 221-20-26, info@mibio.ru Создание сайта Wilmark Design

Карта сайта  Яндекс.Метрика