МИКРОБИОЛОГИЯ
ХИМИЯ
Главная О компании Партнеры Контакты Новости
МикроБио
МикроБио

(495) 221-20-26
E-mail
Пароль регистрация
напомнить пароль



Кампилобактер


Рост кампилобактера - CCDA агар

Рост кампилобактера - CCDA агар

Campylobacter spp.

В настоящее время кампилобактер рассматривается как ведущая причина бактериального гастроэнтерита у населения во всем мире. Существует растущий спрос на обнаружение кампилобактера в пищевых продуктах для соблюдения новых правил его контроля в продукции птицеводства. Большинство видов Campylobacter относительно метаболически неактивны, что затрудняет их идентификацию на основе биохимических характеристик. Наиболее широко используемые методы для контроля пищевых продуктов при выявлении кампилобактера - это традиционные способы культивирования патогена на питательных средах. Классический метод обнаружения возбудителя включает этап предобогащения образца в течение 48 ч и последующее выделение характерных бактерий на селективном агаре. При этом результаты окончательной идентификации патогена доступны только через 4-5 дней. Оба этапа культивирования выполняются в  микроаэрофильных условиях. Этапы идентификации патогена трудоемкие и длительные.

 

Кампилобактериоз

Кампилобактериоз - это заболевание, вызываемое видами Campylobacter, наиболее часто видом C. jejuni. Болезнь проявляется в виде воспалений, иногда как кровавый понос или дизентерия, сопровождается судорогой, лихорадкой и болями в животе. Недавно установлено, что отдельные штаммы C. jejuni вызывают изнурительное неврологическое расстройство - синдром Гийена-Барре (СГБ), а также реактивные артриты. Случаи инфицирования человека другими видами  Campylobacter (С. lari и недавно открытым видом С. upsaliensis) составляют небольшой процент. Виды Campylobacter характеризуются высокой вирулентностью: инфекционная доза составляет всего лишь 500 клеток бактерий. Болезнь, как правило, вызывается потреблением недостаточно термически обработанных продуктов («красное мясо» птицы, моллюски, сырое молоко). Менее распространены инфекции, связанные с употреблением загрязненных фруктов и овощей. Кроме того, источниками инфекции Campylobacter может быть зараженная вода, загрязненная стоками с сельскохозяйственных полей, животноводческих и птицеводческих ферм. 


Singlepath-Campylobacter - Экспресс-тест

Singlepath-Campylobacter - Экспресс-тест

Патогенность, масштабы заболевания

Кампилобактерии относятся к возбудителям зооантропонозных инфекций с фекально-оральным механизмом передачи и преимущественным поражениям пищеварительного тракта организма-хозяина. Кампилобактериоз регистрируется повсеместно в виде спорадических случаев, эпидемических очагов с пищевым и водным путем передачи инфекции. Заболевание распространено повсеместно, на его долю по данным ВОЗ приходится 5-15% всех диарейных болезней. В тропических странах кампилобактеры ведущий этиологический агент острых кишечных инфекций. Кампилобактериозы здесь не менее значимы, чем сальмонеллезы и шигеллезы, а по тяжести клинического течения инфекции превосходят их. Об этом косвенно свидетельствует высокая заболеваемость туристов, возвращающихся из районов с жарким климатом. При этом у местного населения довольно часто отмечается бессимптомное носительство кампилобактерий, обнаруживаемых в кале (у 17% и более) здоровых людей. В США, Японии и некоторых странах Европы описано значительное число пищевых и водных вспышек кампилобактериозного энтерита с вовлечением в эпидемический процесс сотен и даже тысяч людей. В России кампилобактериоз встречается повсеместно. Эпидемиологически значимыми источниками заболевания являются птицы (цыплята), крупный рогатый скот и свиньи. Человек при определенных условиях также может являться источником инфекции, особенно для лиц с иммунодефицитным статусом и для детей в раннем возрасте. В целом люди высоко восприимчивы к кампилобактериозу. В последнее десятилетие в большинстве стран мира, наряду с ростом заболеваемости кампилобактериозом, наблюдается рост уровня зараженности кампилобактериями домашних животных, птиц, обсемененности пищевых продуктов, кормов, воды, других объектов окружающей среды.

Таксономия

Кампилобактер – род спирально извитых аспорогенных бескапсульных падвижных грамотрицательных хемоорганотрофных микроаэрофильных или анаэробных бактерий. Род Campylobacter spp. Относится к  семейству  Spirillaceae. В природном резервуаре встречается свыше 10 патогенных видов. Campylobacter jejuni вызывает у человека  острое лихорадочное желудочно-кишечное расстройство; в патологии человека имеют значение также C. fetus, C. coli. Виды С.concicus  и C. sputorum  вызывают у человека, соответственно, болезни ротовой полости, либо диарею и кожные поражения. Род кампилобактер имеет О- и Н-антигены, по которым его штаммы подразделяются на 60 сероваров.

Морфология бактерий и колоний

Кампилобактеры – мелкие, тонкие палочки (0,2-0,5 х 0,5-8 мкм), имеющие форму запятой или  S-образную, с одним или более завитками, со жгутиками на одном или обоих полюсах. В мазке имеют вид запятой, буквы S, либо галочки (при соединении двух клеток). Пигментов не образуют. На твердых средах кампилобактеры образуют плоские влажные слизистые сероватые «расползающиеся» каплеобразные колонии с неровными краями, либо мелкие дискретные блестящие выпуклые колонии размером 1-2 мм. В стареющих культурах (через 48-72 ч инкубации на твердой среде) могут обнаруживаться кокковидные клетки. На полужидких и жидких средах образуют поверхностную голубовато-серую пленку. Кампилобактеры обладают быстрым движением, взятые с агара клетки движутся волнообразно, из бульона – спиралевидно; до 10% штаммов могут быть неподвижными.

Физиолого-биохимическая характеристика

Кампилобактеры ассимилируют органические кислоты. Оптимальный рост зарегистрирован на питательных средах со сниженной концентрацией кислорода при 37-43оС и рН 7, отдельные виды растут и при 25оС. Желатину, мочевину, липиды не ферментируют, реакции с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра отрицательны. У млекопитающих, включая человека, а также у птиц бактерии обитают в полости рта, кишечника, в половых путях. Микроаэро- и капнофилы, то есть для роста необходима повышенная концентрация СО2. Растут на сложных питательных средах с добавлением крови, гемина, гидролизата белков, аминокислот, ростовых факторов и солей. Метаболизм дыхательного типа, сахара не сбраживают, биохимические и ферментативные свойства выражены слабо. Проявляют каталазную и оксидазную активность, восстанавливают нитраты, продуцируют H2S. Обладают плазмидами, с которыми связана антибиотикоустойчивость. Восприимчивы к действию высоких температур, погибают при нагревании до 60оС в течение 1-15 минут; при пастеризации (71÷77 оС) – в течение 15 секунд; при кипячении – в течение нескольких секунд. На выживаемость кампилобактерий при тепловой обработке значительно влияют состав и структура загрязненных ими объектов внешней среды. Бактерии плохо переносят транспортировку. Гибель клеток, находящихся на поверхности твердых пищевых продуктов, происходит значительно быстрее, чем внутри. Бактерии чувствительны к высушиванию, УФ-лучам, действию прямого солнечного света. Хлорирование воды обеспечивает быструю гибель кампилобактерий. Против них дезинфицирующие средства активны в режимах, рекомендованных в отношении инфекций, обусловленных грамотрицательными бактериями.


foodproof Campylobacter - Экспресс-тест

foodproof Campylobacter - Экспресс-тест

Источники и факторы передачи инфекции

Кампилобактерии характеризуются высокой вирулентностью: инфекционная доза для человека составляет всего 500 бактерий; для человека может быть опасной даже контаминация порядка 4 КОЕ/г мяса. Важнейший источник инфекции – сельскохозяйственные и домашние животные, птицы (в том числе водоплавающие), редко человек. Механизм передачи – фекально-оральный, пути передачи – пищевой, водный, контактно-бытовой или половой. Случаи заболевания регистрируются в течение всего года, но чаще в летне-осенние месяцы. Факторами передачи инфекции служат разнообразные пищевые продукты (мясо птицы, говядина, свинина, молоко и другие), не прошедшие достаточной термической обработки или вторично контаминированные вследствие нарушения технологии приготовления, несоблюдении условий и сроков хранения и реализации продукции. Вакуумная упаковка пищевых продуктов, полуфабрикатов и готовых блюд способствует выживаемости кампилобактеров и даже (при благоприятных температурных условиях) их размножению. Кампилобактеры,  являясь микроаэрофилами, не обладают способностью  длительно выживать во внешней среде при контакте с кислородом, однако они хорошо сохраняются в водной среде при низких температурах. Поэтому на территориях, где не решены вопросы подачи населению безопасной питьевой воды, преобладающим становится именно водный путь передачи инфекции. Заболевания возникают при потреблении сырой воды из открытых водоемов, контаминированных кампилобактерами, а также из аварийных водопроводных сетей, загрязненных канализационными выбросами, стоками мясокомбинатов, объектов птицеводства и животноводства. Бытовой путь передачи реализуется при прямом контакте с инфицированными животными (особенно с курами), у которых часто наблюдается бессимптомное носительство возбудителя. Описаны случаи передачи возбудителя контактно-бытовым путем среди членов семьи или в специализированных закрытых лечебных учреждениях, что объясняется низкой инфекционной дозой патогена.

Патогенез

Кампилобактериоз характеризуется полиморфностью клинических проявлений инфекции. Наиболее распространенная форма течения инфекции – энтероколитпри этом бактерии быстро колонизируют верхние отделы тонкой кишки. Также могут наблюдаться системные поражения – септицемия, менингит, сердечно-сосудистой системы (тромбофлебиты, миокардиты, эндокардиты), почек и мочевыводящих путей, печени и желчного пузыря, нервной системы (парезы, параличи, полиневриты), опорно-двигательного аппарата (артриты, синовииты, бурситы). Имеет место также и неонатальная патология  – септические аборты и преждевременные роды, сопровождающиеся развитием септицимии, менингитов и энтеритов у новорожденных. Заболевания человека кампилобактериозом классифицируют на 4 группы: 1) диареи (энтероколиты) и сепсис, 2) локальные внекишечные инфекции (менингиты, энцефалиты, эндокардиты), 3) гнойно-воспалительные заболевания новорожденных, 4) заболевания ротовой полости. Гастроэнтерит возникает в результате действия энтеро- и цитотоксина, выделяемых некоторыми штаммами кампилобактера в желудочно-кишечном тракте. Инкубационный период заболевания составляет, как правило, 2-3 дня. Болезнь начинается остро, с диспептических расстройств (диарея, рвота), интоксикации, повышения температуры; продолжительность острого течения энтероколита – 2-10 суток. 

Санитарно-эпидемиологический надзор и контроль

Уполномоченные органы осуществляют контроль за соблюдением требований санитарного законодательства РФ, которые направлены:

– на предупреждение контаминации кампилобактериями продовольственного сырья и пищевых продуктов как в процессе их производства, переработки, транспортировки, хранения, так и на всех этапах реализации населению;

– на предотвращение попадания возбудителей в готовые пищевые продукты и воду;

– на обеспечение качества воды в водоисточниках и распределительных сетях;

– на соблюдение требований по содержанию открытых водоемов;

– на соблюдение требований по очистке сточных вод птицеводческих и животноводческих хозяйств;

– на соблюдение требований по обеспечению условий труда в животноводческих и птицеводческих хозяйствах;

– на обеспечение содержания, эксплуатации, соблюдения противоэпидемического режима лечебно-профилактических, в первую очередь акушерских стационаров, детских дошкольных и других организаций.

Целью государственного санитарно-эпидемиологического надзора за кампилобактериозами является оценка эпидемиологической ситуации, тенденций возможного развития с учетом прогнозов и динамики эпидемического процесса для разработки адекватных санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий, направленных на снижение заболеваемости кампилобактериозами и предупреждение возникновения эпидемических очагов, а также предупреждение формирования тяжелых и хронических форм инфекции.

Предупреждение контаминации кампилобактериями пищевых продуктов, полуфабрикатов и готовых блюд в сфере общественного питания обеспечивается соблюдением требований нормативных правовых документов в отношении содержания пищеблоков учреждений и предприятий, организаций торговли, независимо от их организационно-правового статуса и формы собственности.

Ответственность за безопасность пищевых продуктов несет юридическое лицо или индивидуальный предприниматель – производитель продукции, за безопасность воды – юридическое лицо или индивидуальный предприниматель, оказывающий услуги населению по водопользованию.  

Меры по профилактике загрязнения кампилобактериями пищевых продуктов при их производстве и предотвращению перекрестной контаминации продукции возбудителем при последующей переработке, транспортировании, хранении, реализации являются частью общих мер, направленных на недопущение инфицирования продукции возбудителями инфекционных болезней. Они предусматривают следующее:

– обеспечение поточности технологических процессов и раздельных зон для сырья и готовых продуктов при производстве, хранении и реализации пищевых продуктов;

– ограничения перемещений работников и оборудования между зонами переработки сырья, складских помещений и готовой продукции в помещениях и на территории пищевых объектов;

– строгое соблюдение технологий убоя скота и птицы, первичной переработки, изготовления в соответствии с установленными требованиями;

– исключения возможности загрязнения готовой продукции, в/на которой могут длительно выживать термофильные кампилобактерии (включая продукцию, упакованную в пленки под вакуумом и в модифицированную газовую атмосферу), другой продукцией, которая может быть источником этих бактерий (сырые мясо и субпродукты птицы, полуфабрикаты из них, яйца и яйцепродукты жидкие и сухие, мясо и субпродукты скота сырые и полуфабрикаты из них, молоко сырое) или загрязненной водой,

– своевременную эффективную санитарную обработку и дезинфекцию оборудования, инвентаря;

– соблюдение правил транспортировки, хранения и реализации пищевых продуктов (в первую очередь обеспечение непрерывности холодовой цепи, недопущение реализации населению непотрошеной птицы, за исключением дичи, яиц с нарушенной скорлупой ("бой"), сырых продуктов животного происхождения и полуфабрикатов из них вместе с готовыми к употреблению продуктами).

На наиболее эпидемиологически значимых в плане кампилобактериоза птицеводческих и животноводческих хозяйствах (фермах, отарах, птицефабриках), бойнях, птицеперерабатывающих и мясоперерабатывающих предприятиях программа противоэпидемических мероприятий должна включать:  

1) анализ опасных факторов производства, определение рисков загрязнения конкретных видов сырья и пищевых продуктов возбудителями кампилобактериоза и определение контрольных мер;

2) установку критических контрольных точек (ККТ) в процессе производства, на которых требуется проведение контроля, в том числе лабораторного;

3) разработку и установку контрольных параметров;

4) ведение мониторинга ККТ;

5) ведение учета и анализа показателей, регистрируемых в ККТ.

Объектами производственного бактериологического контроля на пищевых объектах, эпидемиологически значимых по кампилобактериозу, являются сырье (в том числе смывы с поверхности тушек птицы, мяса, субпродуктов, яиц), смывы с оборудования, инвентаря, тары, рабочих поверхностей, которые могут быть контаминированы возбудителями кампилобактериоза, с рук работников, соприкасающихся с продукцией, вода для охлаждения продукции.

Производственный бактериологический контроль осуществляется в соответствии с методами анализа, в том числе экспресс-анализа, утвержденными в установленном порядке. При обнаружении термофильных кампилобактерий в смывах с тушек птицы, яиц, мяса, а также с технологического оборудования, инвентаря убойных, яйцеобрабатывающих цехов проводят внеочередную тщательную механическую и санитарную обработку, дезинфекцию оборудования, включая холодильные камеры. При последующем бактериологическом контроле за проведенными мероприятиями термофильные кампилобактеры в смывах не должны обнаруживаться.

Методы обнаружения

Установлено, что наблюдаемые особенности географического распространения кампилобактериоза определяются не истинной заболеваемостью населения, а лишь уровнем организации лабораторной диагностики, которая во многих странах и регионах либо отсутствует, либо осуществляется в недостаточном объеме. Микробиологическая диагностика кампилобактериоза основана на выделении чистой культуры возбудителя из испражнений, рвотных масс, промывных вод из желудка посевом на кровяной или эритритный агар с железо-сульфито-пируватными добавками. Для видовой дифференцировки кампилобактеры культивируют при различных температурных режимах.

Классический метод

Метод определения бактерий рода Campylobacter в продуктах и биоматериале основан на высеве определенных количеств исследуемого продукта (биоматериала) в жидкие селективные среды, содержащие антибиотики и аэротолерантные добавки с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективного агара, с последующим выделением чистой культуры. Все этапы инкубации посевов осуществляются в микроаэрофильных условиях. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность бактерий к видам рода Campylobacter. Для обнаружения кампилобактеров используют селективный бульон Болтона. Инкубируют при 37оС в течение 4-6 ч и затем при 41,5оС в течение 44 (±4) ч. Далее из полученных культур проводят посев на селективный агар CCDA (с углем и антибиотиками), посевы инкубируют при 41,5оС в течение 44 (±4) ч с целью обнаружения присутствия колоний, которые по своим характеристикам предположительно являются Campylobacter.  

Селективный бульон Болтона

Селективный агар CCDA (без крови) для обнаружения кампилобактера


Singlepath Direct Campy Poultry Kit

Singlepath Direct Campy Poultry Kit

Альтернативные (ускоренные) методы

Для ускоренного обнаружения Campylobacter, сокращения трудозатрат разработаны, испытаны и широко применяются альтернативные (ускоренные) методы выявления возбудителя. Многие из этих методов официально рекомендованы в РФ и широко используются.

1) Иммунохроматографические экспресс-тесты 

         - Singlepath®-Campylobacter

         - Singlepath Direct Campy Poultry Kit

2) ПЦР-анализ в реальном времени

         - foodproof-Campylobacter

Ускоренные методы позволяют существенно (на 24-48 ч) сократить продолжительность исследований. Обладая высокой cспецифичностью, они обеспечивают надежное выявление Campylobacter в анализируемом материале.

Нормативная документация

МУК 4.2.2321-08 Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах

СП 3.1.7.2816-10 Профилактика кампилобактериоза среди людей

ГОСТ Р ИСО 10272-1-2010 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Часть 1. Метод обнаружения Campylobacter spp


МикроБио, (495) 221-20-26, info@mibio.ru Создание сайта Wilmark Design

Карта сайта  Яндекс.Метрика