МИКРОБИОЛОГИЯ
ХИМИЯ
Главная О компании Партнеры Контакты Новости
МикроБио
МикроБио

(495) 221-20-26
E-mail
Пароль регистрация
напомнить пароль



Сальмонеллы


Salmonella enteritidis - XLD-агар

Salmonella enteritidis - XLD-агар

Сальмонеллы (Salmonella spp.)

Род сальмонелла относится к семейству Enterobacteriaceae. Бактерии палочковидные, грамотрицательные, аспорогенные, преимущественно подвижные. Во всем мире сальмонелла является одним из наиболее распространенных возбудителей пищевых отравлений, инфицирующих большинство видов сырых продуктов (например, мясо, яйца, растительные продукты). Устойчивость бактерий к высушиванию в сочетании с их высокой термостойкостью создает проблему защиты от патогена большинства сухих и полусухих продуктов. Согласно законодательству в сфере питания большинства стран содержание сальмонеллы не допускается в 25 г пищевого продукта. Для получения простого ответа (да/ нет) о наличии сальмонеллы в пище и кормах при использовании традиционных микробиологических методов необходимо в общей сложности затратить до 5 дней. Для продуктов, нуждающихся в быстрой реализации, это означает значительную задержку. Для удовлетворения требований производителей продуктов питания относительно быстрой реализации готовой продукции и снижения затрат на ее хранение необходимо использовать инновационные ускоренные методы обнаружения сальмонеллы. Таким образом, ускоренные методы анализа сальмонелл вызывают все больший интерес. Экспресс-тесты, предлагаемые для этих целей, должен быть специфичны, чувствительны, удобны и экономически эффективны. В  зависимости от количества исследуемых образцов и требований к специфичности метода  выбор может быть сделан  либо в пользу молекулярного анализа бактериальной ДНК методом ПЦР (как правило, для высокопроизводительной лаборатории), либо в пользу иммунодиагностических тестов (при анализе меньшего количества образцов).

Сальмонеллез

У большинства людей, инфицированных сальмонеллой, развиваться диарея, лихорадка и боли в животе через 12-72 ч после заражения. Болезнь обычно длится 4-7 дней, и большинство пациентов выздоравливают без лечения. Тем не менее, в некоторых случаях заболевание может быть настолько серьезными, что требуется госпитализация. У таких больных сальмонеллезная инфекция может распространиться из кишечника в кровь и другие участки тела. Если больной своевременно не прошел лечение антибиотиками, то это может привести к смерти. Пожилые люди, младенцы и лица с нарушениями иммунной системы будут в первую очередь поражаться наиболее тяжелой формой заболевания.

Патогенность

Сальмонеллы относятся к наиболее опасным возбудителям кишечных инфекций человека и сельскохозяйственных животных. Согласно ВОЗ в мире каждый год регистрируется до 1,3 млрд. случаев сальмонеллеза, при этом динамика заболевания населения имеет тенденцию к росту. При отсутствии эффективного лечения летальные случаи у людей составляют от 1-3  до 10-15%.  Ежегодно в США заболевание регистрируется у 1,4 млн. жителей, а материальные затраты, связанные с последствиями и профилактикой болезни, оценивается в $1-2,3 млрд. В России эта болезнь в структуре острых кишечных инфекций занимает второе место.

Таксономия

Род Salmonella, насчитывающий свыше 2500 сероваров (серотипов), входит в семейство Enterobacteriaceae (энтеробактерий). По современной классификации, основанной на ДНК-анализе, род Salmonella  включает патогенный для человека и теплокровных животных вид S. enterica. Этот вид разделен на 6 подвидов. Подвид S. enterica subsp. Enteritidis – возбудитель пищевых токсикоинфекций. Подвиды S. enterica subsp. Typhi, S. enterica subsp. Paratyphi A, B – возбудители у людей брюшного тифа, паратифов А и В.

Морфология

Клетки сальмонеллы – это подвижные (благодаря жгутикам), аспорогенные грамотрицательные прямые палочки (0,5–1х1–3 мкм) с закругленными концами. Встречаются также неподвижные особи и штаммы. Капсулу не образуют, факультативно-анаэробные хемоорганотрофы с окислительным и бродильным метаболизмом. Хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных средах могут образовывать колонии в R-форме (шероховатые) и S-форме (гладкие), на жидких дают диффузное помутнение. Колонии в S-форме средних размеров, блестящие, полупрозрачные, с голубоватым оттенком. При посеве крови лучшими жидкими средами обогащения является желчный бульон, при посеве биоматериалов (фекалии, желчь, моча), содержащих дополнительную флору, селенитовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах бактерии образуют бесцветные колонии, на висмут-сульфитном агаре – колонии черного цвета.


Singlepath-Salmonella - Экспресс-тест

Singlepath-Salmonella - Экспресс-тест

Биохимическая характеристика

Сальмонеллы обладают выраженной, характерной для рода биохимической активностью. Для их идентификации важно учитывать следующие биохимические свойства:

1) ферментация глюкозы и других углеводов (маннита, мальтозы) до кислоты и газа (подвид S.typhi выделяет только кислоту),

2) отсутствие ферментации лактозы, сахарозы, салицина и мочевины,

3) реагируют с метилротом, продуцируют сероводород, индол (как правило) не образуют, - оксидаза отрицательны, каталаза положительны, реакция Фогеса-Проскауэра отрицательна,

4) температурный оптимум для роста – 35-37оС, рост полностью прекращается при 5оС; оптимум рН=7,2-7,4.

Согласно серологической классификации подавляющее большинство патогенных для человека сероваров (серотипов) сальмонелл относится к A, B, C, D и E группам. Сальмонеллы типируют по схеме Кауффмана-Уайта в реакции агглютинации. Для ее постановки применяют гипериммунные сыворотки или моноклональные антитела к сальмонеллам. На серотипировании основаны диагностика сальмонеллеза и эпидемиологический анализ возбудителей.

Источники и факторы передачи инфекции

Сальмонеллезы (брюшной тиф, паратифы, гастроэнтериты, септицемия и др.) – широко распространенные пищевые заболевания животных и человека с фекально-оральным механизмом передачи инфекции. У человека пищевые токсикоинфекции сопровождаются поражением желудочно-кишечного тракта и обезвоживанием организма. Заражающая доза от 1000 до 10 тыс. клеток. Постоянная среда обитания – кишечник человека и теплокровных животных, являющихся  резервуаром инфекции. Загрязненные пищевые продукты и сырье, а также вода – основные источники и факторы передачи возбудителя. В пищевые продукты патоген переходит из загрязненного сырья. Почва участвует в контактном пути передачи инфекции. Наличие сальмонелл в почве или воде всегда свидетельствует о загрязнении этих сред испражнениями инфицированных людей и/или животных – птиц, крупного рогатого скота, свиней, кошек, собак, голубей. Их инфицированность сальмонеллами колеблется от 6-7 до 80%.


3M Molecular Detection System - Система молекулярного обнаружения патогенов

3M Molecular Detection System - Система молекулярного обнаружения патогенов

Основные источники инфекции

В США на  долю сальмонеллеза приходится около 9% пищевых инфекций, причем значительная часть населения этой страны является его бессимптомными бактерионосителями. Загрязненные птицепродукты, мясо и мясные продукты, молоко, сыр, сливочное масло, овощи и фрукты, полуфабрикаты и приправы (майонез, яичный порошок, кремы и др.) – основные источники сальмонеллеза. Пищевые продукты контаминируются бактериями также в процессе кулинарной обработки, контакта с носителями, производственным оборудованием, животными-переносчиками (мухи, мышевидные грызуны, комнатные животные). Продолжительность жизнеспособности сальмонелл зависит от вида продукции и условий среды обитания. Так, на поверхности овощей и фруктов бактерии  выживают в течение 5-10 дней,  в молоке – до 20 дней, в пиве и кефире – до 2 месяцев, в колбасных изделиях, мясе (включая соленое), сливочном масле – от 2 до 6 месяцев, в сырах – до 1 года, в замороженном мясе – до 2-3 лет. 

Патогенез 

Различную природу заболевания объясняют множественностью факторов патогенности (эндо-, экзотоксины и др.), которые еще недостаточно изучены. Все вирулентные сальмонеллы продуцируют эндотоксин, индуцирующий развитие лихорадки у инфицированных людей (с повышением температуры до 39-40о). После перорального заражения, попав в тонкий кишечник, сальмонеллы инвазируют слизистую кишечника и, размножаясь в макрофагах, формируют первичный очаг инфекции. По окончании инкубационного периода (через 10-14 суток после заражения) попав в кровь, сальмонеллы вызывают бактериемию. Возбудители тифа и паратифа с током крови разносятся по всему организму, оседая в клетках печени, селезенки, легких, костного мозга, а также желчного пузыря. К концу 2-й недели от начала заболевания возбудитель выделяется из организма больного с мочой, испражнениями, материнским молоком, слюной. Иммунитет к заболеванию не формируется.


3М Petrifilm Salmonella Express System (SALX)

3М Petrifilm Salmonella Express System (SALX)

Методы обнаружения

Важную роль играет специфическая профилактика сальмонеллезов, заключающаяся в проведении ветеринарно-санитарных, санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий. Профилактика сопровождаются перманентным контролем  возбудителя в пище, фураже, сырье и воде.

Классический метод

Питательные среды для выделения сальмонелл

      - Забуференная пептонная вода

      - Среда Раппапорта-Вассилиадиса

      - Селенитовая среда

      - Тетратионатный бульон

      - Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар

      - Бриллиантовый зеленый агар

      - Висмут-сульфит агар

Классическая методика исследования сальмонелл с использованием питательных сред. Однако из-за длительности процедуры анализа для определения патогена одного классического метода недостаточно.

Альтернативные (ускоренные) методы. Для ускорения выявления сальмонелл, значительного сокращения трудозатрат и экономии ресурсов в последние десятилетия за рубежом разработаны, испытаны и широко применяются альтернативные (ускоренные) методы выявления возбудителя. Многие из этих методов официально рекомендованы в РФ и широко используются.

1) Модифицированные питательные среды 

      - MSRV агар

      - Salmosyst

      - Рамбах-агар

      - XLT4 агар

2) Иммунохроматографи­ческие экспресс-тесты 

      - Singlepath®-Salmonella

3) ПЦР-анализ в реальном времени 

      - foodproof Salmonella

4) Система молекулярного обнаружения патогенов 

      - 3М Мolecular Detection System (MDS)

5) Петрифильмы для обнаружения сальмонелл 

      - 3M Petrifilm™ Salmonella Express System (3M™ Petrifilm™ SALX)

Ускоренные методы позволяют существенно (на 24-48 ч) сократить продолжительность исследований. Обладая высокой чувствительностью, они обеспечивают надежное выявление сальмонелл в анализируемом материале.

Нормативная документация

МР 24 ФЦ 976 Методы выявления патогенных микроорганизмов с использованием иммунохроматографических экспресс-тестов производства Merck (Германия)

ГОСТ Р 50455-92. Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002). Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ Р 53665-2009. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл;

- СП 3.1.7.2616-10. Санитарно-эпидемические правила. Профилактика сальмонеллеза. М.: Роспотребнадзор. 2010.18 с.


МикроБио, (495) 221-20-26, info@mibio.ru Создание сайта Wilmark Design

Карта сайта  Яндекс.Метрика