Инструкция

Среда Фразера создает оптимальные условия для роста листерий благодаря высокому содержанию питательных веществ и большой буферной емкости.

Все виды листерий гидролизуют эскулин, который расщепляется ферментом b-D-глюкозидазой до эскулетина и глюкозы. Эскулетин образует с ионами железа (III) окрашенный комплекс черного (или оливково-зеленого) цвета. Поэтому рост листерий на бульоне Фразера обычно сопровождается почернением среды. Почернение среды – первый признак возможного наличия листерий.

Высокая селективность питательной среды достигается за счет присутствия хлорида лития, налидиксовой кислоты и акрифлавина. Эти вещества эффективно подавляют рост сопутствующих бактерий. Высокая концентрация хлорида натрия в среде ингибирует рост энтерококков. Акрифлавин ингибирует рост многих грамположительных бактерий. Налидиксовая кислота блокирует процесс репликации ДНК и эффективна против многих грамотрицательных бактерий.

Наилучшие результаты получаются при двухэтапном обогащении, при котором вначале используются половинные концентрации налидиксовой кислоты и акрифлавина. Через 24 ч и 48 ч необходимо сделать высев со среды обогащения Фразера на дифференциально-диагностические среды ПАЛКАМ-агар, Оксфорд-агар или хромогенный агар для листерий (Ottaviani, Agosti).

Наличие в среде Фразера селективных агентов имеет решающее значение при исследовании сильнозагрязненных сопутствующей микрофлорой продуктов (например, фарш). Только при использовании среды, содержащей все необходимые антибиотики, можно надежно выделить
Listeria monocytogenes.

Контроль качества

Основа бульона Фразера – FRASER Listeria Selective Enrichment Broth (base) for microbiology

Питательная среда Мерк, Германия (Merck KGaA)

Кат.№1.10398.0500

Упаковка – 500 г

Добавка аммонийного железа к среде Фразера – FRASER Listeria Ammonium iron (III) Supplement (10 vials)

Кат.№1.00092.0010

Упаковка - 10 флаконов

Селективная добавка к среде Фразера – FRASER Listeria Selective Supplement (10 vials)

Кат.№1.00093.0010

Упаковка - 10 флаконов

Двухэтапное селективное обогащение листерий на среде Фразера в соответствии с ИСО 11290-1 (1996)

Принцип действия

Среда создает оптимальные условия для роста листерий благодаря высокому содержанию питательных веществ и большой буферной емкости. Рост сопутствующих бактерий в значительной степени ингибируется хлоридом лития, налидиксовой кислотой и гидрохлоридом акрифлавина. Эскулин расщепляется b-D-глюкозидазой листерий до эскулетина и глюкозы. Эскулетин образует комплекс с ионами железа (III) оливково-зеленого или черного цвета. Рост листерий на бульоне Фразера обычно сопровождается почернением среды. Наилучшие результаты получаются при двухэтапном обогащении, при котором вначале используются половинные концентрации налидиксовой кислоты и гидрохлорида акрифлавина.

Состав среды (г/л)

Протеозный пептон 5.0; пептон из казеина 5.0; дрожжевой экстракт 5.0; мясной экстракт 5.0; хлорид натрия 20.0; фосфат натрия двузамещенный 9.6; калий фосфорнокислый однозамещенный 1.35; эскулин 1.0; хлорид лития 3.0.

Приготовление среды

Растворить 27,5 г среды в 500 мл дистиллированной воды, автоклавировать 15 мин при 121^оС.

Среда Фразера половинной концентрации

Для приготовления среды Фразера половинной концентрации добавить растворенное содержимое 1 флакона цитрата аммонийного железа FRASER Listeria Ammonium iron (III) Supplement и растворенное содержимое 1 флакона селективной добавки FRASER Listeria Selective Supplement к 500 мл основы среды Фразера, когда температура ее после автоклавирования снизится до 45-50^оС. 

Среда Фразера

Для приготовления среды Фразера добавляют растворенное содержимое 1 флакона цитрата аммонийного железа FRASER Listeria Ammonium iron (III) Supplement и растворенное содержимое 2 флаконов селективной добавки FRASER Listeria Selective Supplement к 500 мл основы среды Фразера, когда температура ее после автоклавирования снизится до 45-50^оС.  рН среды: 7,2±0.2 при 25^оС. Приготовленная среда прозрачная желтовато-коричневого цвета.

Процедура исследования

Первый этап селективного обогащения. Среда Фразера половинной концентрации инкубируется с образцом при температуре 30^оС в течение 24±2 часа. Затем из культуральной среды делается высев на Оксфорд, Палкам агар или Chromocult Listeria Agar.

Второй этап селективного обогащения. После этапа первичного обогащения 0,1 мл образца высевается к 10мл среды Фразера и инкубируется 48ч при 37^оС. После 24ч и 48ч инкубации делается высев на Оксфорд, Палкам агар или Chromocult Listeria Agar.

Контроль качества