Инструкция

Хромогенный агар  для определения колиформ и E.coli усиленной селективности – Chromocult^®Coliform Agar ES (Enhanced Selectivity) for microbiology

Питательная среда Мерк, Германия (Merck KGaA)

Кат.№1.00850.0500

Упаковка – 500 г

Селективный агар для одновременного определения и подсчета колиформных бактерий и E.coli в полуфабрикатах и воде поверхностных водоемов, а также в сточной воде.

Принцип действия

Наличие в среде пептонов и MOPS-буфера обеспечивает быстрый рост колиформных бактерий и эффективную трансформацию хромогенных субстратов. Наличие в среде солей желчных кислот и пропионовой кислоты в значительной степени ингибирует рост грамположительных бактерий и сопутствующей грамотрицательной микрофлоры.

Одновременное определение колиформных бактерий и E.coli достигается комбинацией двух хромогенных субстратов. Субстрат Salmon-GAL расщепляется ферментом –
ß-галактозидазой (характерный фермент колиформных бактерий), приводя к окрашиванию колоний в розовый (до красного) цвет. Определение ß-глюкуронидазы, характерного фермента для E.coli, происходит в результате расщепления субстрата
X-глюкуронида, что приводит к темно-синему окрашиванию положительных колоний.

Поскольку E.coli расщепляет оба хромогенных субстрата (как Salmon-GAL, так и
X-глюкуронид), то колонии E.coli окрашиваются в темно-синий цвет и легко дифференцируются от других колиформных бактерий розового цвета.

Состав среды, (г/л):

Пептоны 5,0; хлорид калия 7.5; МОРS 10,0; соли желчных кислот 1,15; пропионовая кислота 0,5; агар-агар 10.0; хромогенная смесь 0,4.

Приготовление среды:

Растворить 34,5 г в 1 литре дистиллированной воды, дать среде набухнуть в течение 20-30 минут; нагреть на кипящей водяной бане. Перемешивать содержимое для полного растворения (примерно 45 мин). Среда может быть немного мутной. рН: 7,0±0,2 при 25^оС. Не автоклавировать!   Не перегревать!

Готовые чашки со средой опалесцируют и желтоватого цвета. Хранить чашки со средой в холодильнике, в темноте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

Срок годности готовой среды на чашках – 2 недели при хранении 2-4^оС.

Ход исследования:

Фильтровать образец воды, фильтр поместить на поверхность хромогенной среды Chromocult Coliform Agar ES. Инкубировать 24 часа при 35-37^оС.

При посеве продукта высевается количество 0,1-0,2 мл из соответствующего разведения на поверхность хромогенной агаризованной среды. Образцы объема 1 мл высеваются глубинным посевом – к 1 мл образца добавляется 15 мл хромогенной среды 45-50^оС и перемешивается.

Учет результатов:

E.coli: темно-синего (или фиолетового) цвета колонии (реакция с Salmon-GAL и X-глюкуронидом).

Колиформные бактерии:  розового (или красного) цвета колонии (реакция с Salmon-GAL) и темно-синие (до фиолетового) цвета колонии (E.coli).

Другие грамотрицательные бактерии: бесцветные, за исключением некоторых организмов, которые обладают ß-глюкуронидазной активностью. Эти колонии светло-голубого (бирюзового) цвета.