Инструкция

Лактозный агар с Тергитолом-7 и ТТХ - Lactose TTC Agar with Tergitol-7 for microbiology

Кат.№1.07680.0500

Упаковка - 500 г

Селективная дифференциальная среда для выявления и учета Е.coli и колиформных бактерий в воде методом мембранных фильтров. Состав среды полностью соответствует рекомендациям ISO/DIS 9308-1(1988) и AFNOR norm NF 90-414 (1985) Качество воды - Выявление и учет Е.coli и колиформных бактерий - Метод мембранных фильтров.

Принцип действия

Распад лактозы до кислоты регистрируется индикатором бромтимоловым синим, изменяющим цвет среды под фильтром до желтого. Селективность среды обеспечивается гептадецилсульфатом натрия (Тергитол-7) и 2,3,5-трифенил­тетразолиум хлоридом (ТТХ), подавляющими большинство грамполо­жительных бактерий. ТТХ играет роль также и дифференцирующего вещества. Восстановлен­ный лактозоотрицательными бактериями ТТХ окрашивает их колонии в темно-красный цвет. Лактозоположительные Е.coli и колиформные бактерии восстанавливают ТТХ слабо, поэтому их колонии окрашены в желто-оранжевый цвет.

Состав (г/л)

Лактоза 20,0; пептон 10,0; дрожжевой экстракт 6,0; мясной экстракт 5,0; бромтимоловый синий 0,05; Тергитол -7 0,1; агар-агар 12,7.

Добавка: ТТХ 0,025.

Приготовление

Растворить 53,9 г в 1 литре дистиллированной воды и автоклавировать 15 мин при 121°С. Охладить среду на водяной бане до 45–50°С и добавить 5 мл 0,05% водного раствора ТТХ (раствор ТТХ стерилизуется фильтрованием через мембрану 0,2 мкм) из расчета на 100 мл основной среды. Хорошо перемешать и разлить в чашки слоем не менее 5 мм.

рН=7,2±0,2 при 25°С.

Готовая среда прозрачная, зеленого цвета. Раствор ТТХ и питательная среда устойчивы в течение недели при условии хранения при температуре от 2 до 8°С в защищенном от света месте.

Проведение анализа

Детальные инструкции по определению титра содержатся в АРНА: Standard Methods for examination of Water and Wastewater (1998). Тип мембран влияет на характеристику питательной среды. Лучшие результаты получены при использовании целлюлозо-нитратных фильтров фирмы Sartorius (13906-47-ACN). После фильтрации фильтр асептически переносят на поверхность агара. Инкубация 21±3 ч при 36±2°С. Лактозоположительные бактерии образуют желто-оранжевые колонии и под мембранами - желто-оранжевый ореол. Число таких колоний можно считать предварительным числом колоний колиформных бактерий. Для подтверждения принадлежности этих колоний необходимо получить их субкультуры на неселективном агаре (Триптиказо-соевый агар – CASO-agar) и бульоне с триптофаном. Оксидаза-отрицательные колонии следует отнести к колиформным бактериям. Колиформные бактерии, образующие индол из триптофана при 44±0,5°С в течение 21±3 ч, относятся к Е.coli.

Контроль качества