отправить
заявку
категории
Микробиология » Питательные среды Мерк » Сухие питательные среды » Список инструкций питательных сред » 110490 Brucella agar - Питательная среда - Бруцелла агар » Инструкция

Инструкция


    Бруцелла-агар - Brucella Agar

    Кат. №1.10490.0500

    Упаковка - 500 г

    Модифицированная питательная среда Wundt (1957) для выделения и культивирования бруцелл (особенно патогенных штаммов Bruc. melitensis, Bruc. abortus, Bruc. suis) из клинических материалов и пищевых продуктов животного происхождения. Эта питательная среда может быть использована такой, как она есть, или в качестве основы специальных питательных сред. Она соответствует рекомендациям ВОЗ (1953) и публикации Hauser и Koonitz в “Diagnostic Procedures" (1970).

    Принцип действия

    Kuzdas и Morse (1953), Renoux (1954) и Weed (1957) продемонстрировали, что в случае сильной контаминации исследуемого образца рост сопутствующей микрофлоры может быть подавлен добавлением бацитрацина, полимиксина, циклогексимида, возможно - этилвиолета. Циркулин, рекомендованный ранее, больше не используется (Alton и Jones, 1967). Различные штаммы бруцелл могут быть дифференцированы по их чувствительности к красителям тионину и фуксину. Путем добавления этих двух компонентов к Бруцелл-агару можно приготовить дифференциальную питательную среду.

    Состав (г/л)

    Мясной пептон 10,0; казеиновый пептон 10,0; дрожжевой экстракт 2,0; глюкоза 1,0; хлористый натрий 5,0; агар-агар 13,0.

    Приготовление

    Растворить 41 г/л, автоклавировать 15мин при 121 °С. рН 7,0 ± 0,2 при 25°С. Среда прозрачная, желтовато-коричневая.

    Приготовление дифференциального Бруцелла-агара: стерилизовать Бруцелла-arap, охладить, установить рН 6,7±0,1. К 1 литру добавить 1 мл (1:100000), 2 мл (1:50000) или 4 мл (1:25000) водного 1% раствора тионина или основного  фуксина,  смешать. Предварительно растворы следует прогреть 20 мин на кипящей водяной бане.

    Приготовление селективного Бруцелла-агара: к стерильному охлажденному до 45-50°С Бруцелла-агару добавляют стерилизованные фильтрацией растворы следующих соединений: бацитрацин 25000 IU/л, полимиксин В сульфат 6000 IU/л, циклогексимид 100 мг/л и если требуется, этилвиолет 1,25 мг/л

    Проведение анализа

    На поверхность Бруцелла-arapa наносят тонким слоем исследуемый материал или материал из накопительной среды (т.е. Триптозного бульона). Если материал сильно контаминирован, инокулируют им также cелективный Бруцелла-агар.

    Инкубация

    Для первичной культуры инкубируют в атмосфере с 10% СО2 в течение 4-5 дней при температуре 35°С до появления видимого роста. При отсутствии роста обновляют атмосферу с СО2 и инкубируют до 21 дня.

    Готовят субкультуры из индивидуальных колоний на Бруцелла-arape и инкубируют как описано выше. Колонии бруцелл сферической формы, светло-янтарного цвета, влажные, слабо опалесцирующие, прозрачные. Эти признаки могут варьировать в зависимости от рН и влажности. Микроскопия окрашенных по Граму мазков показывает присутствие коротких палочковидных бактерий. Для дифференциации видов бруцелл должны быть выполнены дополнительные тесты.


    Контроль качества

    Тест-штаммы АТСС

    Рост

    Brucella abortus

    хороший / очень хороший

    Brucella melitensis

    хороший / очень хороший

    Brucella suis

    хороший / очень хороший

    Escherichia coli ATCC 25922

    хороший / очень хороший

    Listeria monocytogenes ATCC 19118

    хороший / очень хороший