Иммунохроматографический анализ

Экспресс-тесты Singlepath и Duopath для выявления патогенных микроорганизмов и токсинов в пищевых продуктах

Cтатья в журнале "Молочная промышленность", №1, 2015
Д.М. Соколов, М.С. Соколов, ООО «МикроБио»

Разделы статьи:
- Введение
- Экспресс-методы диагностики
- Тест-системы для ускоренной диагностики
- Иммунохроматографический анализ
- Варианты использования ИХА-тестов
- Валидация и сертификация тест-систем Singlepath и Duopath

Иммунохроматографический анализ
Иммунохроматографический анализ (ИХА) является разновидностью иммуноферментного метода с мечеными компонентами. В ИФА антитела к искомым антигенам метятся ферментом, а в ИХА – коллоидным золотом. Каждый из вариантов имеет свои преимущества. Метка ферментом повышает чувствительность реакции за счет активности самого фермента, усиливающего индикацию положительного результата. Чувствительность ИФА находится в пределах 10²–10⁵КОЕ/мл [4]. Недостатками такой системы являются необходимость инструментального учета результата при помощи специального планшетного фотоколориметра и более сложная методика выполнения, включающая приготовление растворов, внесение нескольких реагентов, многократные промывки и инкубацию в термостате [4]. ИХА обладает меньшей чувствительностью из-за неактивной метки (10⁴–10⁸ КОЕ/мл [5]), но при этом крайне прост в исполнении, а учет результата осуществляется визуально и не требует наличия сложных дорогих приборов и высокой квалификации исполнителя. Иммунохроматографический тест Singlepath® (рис. 1) содержит полоску пористого материала, обеспечивающего распространение жидкости. В зоне внесения исследуемого материала (круглая лунка) полоска пропитана мечеными антителами к искомому антигену. Кроме того, в определенных местах (T и C) нанесены еще две полосы немеченых иммобилизованных антител. Полоса T соответствует тестовой зоне и содержит антитела к искомому антигену, а полоса C–контрольной зоне и содержит антитела, способные связывать меченые антитела из зоны нанесения материала. Жидкий исследуемый материал вносится в специальную лунку, растворяет меченые антитела, которые вместе стоком жидкости движутся к противоположному концу тест-системы. При наличии в материале искомого антигена они связываются с ним и дальше движутся уже в составе комплекса антиген–антитело. При прохождении тестовой зоны иммобилизованные антитела связываются с комплексом антиген–антитело, образуя так называемый «сэндвич». Благодаря его формированию меченые антитела задерживаются в тестовой зоне, и образуется окрашенная полоска. Не связавшийся избыток меченых антител при прохождении контрольной зоны (С) связывается с иммобилизованными антителами контрольной зоны, образуя комплекс. Благодаря фиксации меченых антител в контрольной зоне также образуется окрашенная полоска, подтверждающая работоспособность тест-системы. Таким образом, в случае положительного результата образуются две полосы: в тестовой и контрольной зоне. При отрицательном результате (отсутствие искомого антигена) меченые антитела, не задерживаясь в тестовой зоне, сразу мигрируют в контрольную зону, где связываются с иммобилизованными антителами, образуя только одну полосу в зоне С.

В системах Duopath®, которые предназначены для идентификации сразу двух антигенов, в зоне нанесения исследуемого материала находится смесь двух антител и соответственно имеются две тестовые зоны для каждого антигена. Во всем остальном системы идентичны. Таким образом, благодаря применению в системах Singlepath® и Duopath® иммунохроматографического метода выполнение анализа и учет результатов крайне упрощаются и не требуют ни высокотехнологичного оборудования, ни высококвалифицированного персонала. При этом относительно низкая чувствительность ИХА компенсируется этапом обогащения, который позволяет исследовать образцы с низкими уровнями контаминации и подтверждает жизнеспособность исследуемых объектов.