Инструкция - Агар Фрея (FREY Agar)

FREY Agar – Агар Фрея, Кат.№ 146006.0020

Агар Фрея (FREY Agar) используют для выявления микоплазм птиц в образцах фармацевтической продукции (например, при производстве вакцин).

Состав среды соответствует рекомендациям Европейской фармакопеи (EP, 2.6.7).

Упаковка
Чашки со средой (60 мм), 20 шт/уп.

Принцип действия
Агар Фрея содержит свиную сыворотку для обеспечения усвояемого холестерина, жирных кислот, а также NAD (никотинамиддинуклеотид), необходимый для роста микоплазмы M. synoviae. Благодаря наличию индикатора фенолового красного происходит  изменение цвета среды с красного на желтый или фиолетовый, что указывает на наличие микоплазм. Пенициллин ингибирует рост сопутствующей бактериальной флоры.

Состав среды (г/л)
Агар с сердечной вытяжкой – 33,8, глюкоза – 9, свиная сыворотка – 108 мл, феноловый красный - 0,027, NAD*3H₂0 – 0,09, L-цистеин – 0,09, пенициллин – 45 lkU, витамины – 0,25 мл.  

Исходная среда прозрачная, красного цвета; рН среды 7,6-8,0.

Ход анализа
Проверить каждую чашку перед использованием на стерильность, необходимо работать в условиях асептики, чтобы избежать контаминации.

M. hyorhinis ATCC 29052 требовательный к условиям роста не растет на агаре Фрея.

Тест-штаммы показывают хороший рост на Фрей агаре:
- A. laidlawii (NCTC 10116)
- M. fermentans (NCTC 10117)
- M. gallisepticum (NCTC 10115)
- M. hyorhinis (NCTC 10130)
- M. orale (NCTC 10112)
- M. pneumoniae (NCTC 10119)
- M. synoviae (NCTC 10124)

Согласно рекомендациям Европейской фармакопеи тестируемый образец в количестве 0,2 мл засевают на агар Фрея, инкубируют не менее 14 дней в микроаэрофильных условиях (5-10% CO2) при достаточной влажности при 37°C.

Кроме того, в 100 мл жидкой среды Фрея (Кат.№ 146311) вносят 10 мл исследуемого образца. Жидкие среды плотно закрывают и инкубируют в течение 20-21 дней при 37°С.

На каждый 2-4, 6-8, 13-15 и 19-21 день после посева в жидкую среду (Кат.№ 146311)образцы пересевают на чашки со средой и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 37° C в течение 14 дней, за исключением последнего образца (19-21 дней), который инкубируют в течение 7 дней.

Пробы проверяют каждые 2-3 дня и пересевают, если происходит изменение цвета среды (с красного на желтый или фиолетовый).

Необходимо проводить положительный и отрицательный контроль.
Агаризованные среды просматривают на наличие типичных колоний микоплазм.

Примечание
Не все штаммы микоплазм показывают типичный рост колоний с краем как у жаренной яичницы.

После пересева образцы с желтым или пурпурным цветом среды могут показать отрицательные результаты, поскольку микоплазмы чувствительны к кислой и щелочной среде.

Согласно Европейской фармакопеи образец соответствует, если на агаризованной среде отсутствуют микоплазмы.