Инструкция - Бульон Фрея (FREY Broth)

FREY Broth – Бульон Фрея, Кат.№  146311.0001

Бульон Фрея (FREY Broth) используют для обнаружения микоплазм птиц в образцах фармацевтической продукции (например, при производстве вакцин).

Состав среды соответствует рекомендациям Европейской фармакопеи (EP, 2.6.7).

Упаковка
Флакон с винтовой крышкой со средой 100 мл.

Принцип действия
Бульон Фрея содержит NAD (никотинамиддинуклеотид), необходимый для роста микоплазмы M. synoviae. Благодаря наличию индикатора фенолового красного происходит  изменение цвета среды с красного на желтый или фиолетовый, что указывает на наличие микоплазм. Пенициллин ингибирует рост сопутствующей бактериальной флоры.

Состав среды (г/л)
Бульон с сердечной вытяжкой – 20,2, глюкоза – 9, свиная сыворотка – 108 мл, феноловый красный - 0,027, NAD*3H₂0 – 0,09, L-цистеин – 0,09, пенициллин – 45 lkU, витамины – 0,25 мл. 

Исходная среда прозрачная, красного цвета; рН среды 7,6-8,0.

Ход анализа

M. hyorhinis ATCC 29052 требовательный к условиям роста не растет на бульоне Фрея.

Тест-штаммы показывают хороший рост на бульоне Фрея:
- A. laidlawii (NCTC 10116)
- M. fermentans (NCTC 10117)
- M. gallisepticum (NCTC 10115)
- M. hyorhinis (NCTC 10130)
- M. orale (NCTC 10112)
- M. pneumoniae (NCTC 10119)
- M. synoviae (NCTC 10124)

В соответствии с рекомендациями Европейской фармакопеи к 100 мл бульона Фрея добавляют 10 мл исследуемого образца. Флаконы плотно закрывают и инкубируют в течение 20-21 дней при 37°С. Пробы проверяют каждые 2-3 дня и пересевают, если происходит изменение цвета среды (с красного на желтый или фиолетовый).

На каждый 2-4, 6-8, 13-15 и 19-21 день после посева в жидкую среду образцы пересевают на чашки с агаром Фрея (Кат.№ 146006) и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 37°C в течение 14 дней, за исключением последнего образца (19-21 дней), который инкубируют в течение 7 дней.

Кроме того, тестируемый образец в количестве 0,2 мл засевают на агар Фрея, инкубируют не менее 14 дней в микроаэрофильных условиях (5-10% CO2) при достаточной влажности при 37°C.

Необходимо проводить положительный и отрицательный контроль.

Агаризованные среды просматривают на наличие типичных колоний микоплазм.

Примечание.
После пересева образцы с желтым или пурпурным цветом среды могут показать отрицательные результаты, поскольку микоплазмы чувствительны к кислой и щелочной среде.

Согласно Европейской фармакопеи образец соответствует, если на агаризованной среде отсутствуют микоплазмы.