Инструкция - Агар Хейфлика (HAYFLICK Agar)

HAYFLICK Agar – Агар Хейфлика, Кат.№ 146029.0020

Агар Хейфлика (HAYFLICK агар) используют для выявления микоплазм в образцах фармацевтической продукции, особенно при производстве вакцин, культур клеток и культур вирусов.

Состав среды соответствует рекомендациям Европейской фармакопеи (EP, 2.6.7).

Упаковка
Чашки со средой (60 мм), 20 шт/уп.

Принцип действия
Агар Хейфлика содержит лошадиную сыворотку для обеспечения усвояемого холестерина и жирных кислот. Дезоксирибонуклеиновая кислота обеспечивает пуриновые и пиримидиновые основания, которые не синтезируются микоплазмами. Благодаря индикатору феноловому красному среда меняет цвет с красного на желтый или фиолетовый при наличии микоплазм. Пенициллин ингибирует рост сопутствующей бактериальной флоры.

Состав среды (г/л)
Дрожжевой экстракт – 19,6, агар с сердечной вытяжкой – 29,6, лошадиная сыворотка – 157, феноловый красный - 0,024, пенициллин – 40 lkU, ДНК натриевая соль – 0,019.

Исходная среда прозрачная, красного цвета; рН среды 7,6-8,0.

Ход анализа
Проверить каждую чашку перед использованием на стерильность, необходимо работать в условиях асептики, чтобы избежать контаминации.

M. synoviae не растет на агаре Хейфлика, поскольку для роста необходим NAD.
M. hyorhinis ATCC 29052 также требовательный к условиям роста не растет на агаре Хейфлика.

Тест-штаммы показывают хороший рост на агаре Хейфлика:
- M. fermentans (NCTC 10117)
- M. gallisepticum (NCTC 10115)
- M. hyorhinis (NCTC 10130)
- M. orale (NCTC 10112)
- M. pneumoniae (NCTC 10119)

M. fermentans и A. laidlawii растут быстрее на средах Фриза (Кат.№ 146180) и Фрея (Кат.№146311).

Согласно рекомендациям Европейской фармакопеи тестируемый образец в количестве 0,2 мл засевают на агар Хейфлика, инкубируют не менее 14 дней в микроаэрофильных условиях (5-10% CO2) при достаточной влажности при 37°C.

Кроме того, в 100 мл жидкой среды Хейфлика (Кат.№ 146452) вносят 10 мл исследуемого образца. Жидкие среды плотно закрывают и инкубируют в течение 20-21 дней при 37°С.

На каждый 2-4, 6-8, 13-15 и 19-21 день после посева в жидкую среду образцы пересевают на чашки со средой Хейфлика и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 37° C в течение 14 дней, за исключением последнего образца (19-21 дней), который инкубируют в течение 7 дней.

Пробы проверяют каждые 2-3 дня и пересевают, если происходит изменение цвета среды (с красного на желтый или фиолетовый).

Необходимо проводить положительный и отрицательный контроль.
Агаризованные среды просматривают на наличие типичных колоний микоплазм.

Примечание
Не все штаммы микоплазм показывают типичный рост колоний с краем как у жаренной яичницы.

После пересева образцы с желтым или пурпурным цветом среды могут показать отрицательные результаты, поскольку микоплазмы чувствительны к кислой и щелочной среде.

Согласно Европейской фармакопеи образец соответствует, если на агаризованной среде отсутствуют микоплазмы.