Инструкция - Агар Фриза (FRIIS Agar)

FRIIS Agar – Агар Фриза, Кат.№ 146007.0020

Агар Фриза используют для выявления нептичьих микоплазм в образцах фармацевтической продукции, особенно при производстве вакцин, культур клеток и культур вирусов.

Состав среды соответствует рекомендациям Европейской фармакопеи (EP, 2.6.7).

Упаковка
Чашки со средой (60 мм), 20 шт/уп.

Принцип действия

Агар Фриза содержит лошадиную и свиную сыворотки для обеспечения усвояемого холестерина и жирных кислот. Благодаря индикатору феноловому красному среда меняет цвет с красного на желтый или фиолетовый при наличии микоплазм. Бацитрацин ингибирует синтез клеточной стенки сопутствующих грамположительных бактерий.

Состав среды (г/л)
Дрожжевой экстракт – 5,57, лошадиная сыворотка – 90, свиная сыворотка – 90, DEAE Декстран – 0,103, бульон с сердечной вытяжкой – 1,85, PPLO-бульон – 4,1, феноловый красный - 0,012, Na₂HPO₄ – 0,041, KH₂PO4 – 0,032, MgSO₄ – 0,054, CaCl₂ – 0,096, NaCl – 4,3, KCl – 0,215, MgCl₂ – 0,054, бацитрацин – 0,136, агар 11.

Исходная среда прозрачная, красного цвета; рН среды 7,2-7,6. 

Ход анализа
Проверить каждую чашку перед использованием на стерильность, необходимо работать в условиях асептики, чтобы избежать контаминации.

M. synoviae не растет на агаре Фриза, поскольку для роста необходим NAD.
M. hyorhinis ATCC 29052 требовательный штамм к условиям роста, не растет на агаре Фриза.

Тест-штаммы показывают хороший рост на агаре Фриза:

- A. laidlawii (NCTC 10116)
- M. fermentans (NCTC 10117)
- M. gallisepticum (NCTC 10115)
- M. hyorhinis (NCTC 10130)
- M. orale (NCTC 10112)
- M. pneumoniae (NCTC 10119)

Согласно рекомендациям Европейской фармакопеи тестируемый образец в количестве 0,2 мл засевают на агар Фриза, инкубируют не менее 14 дней в микроаэрофильных условиях (5-10% CO2) при достаточной влажности при 37°C.

Кроме того, в 100 мл жидкой среды Фриза (Кат.№ 146180) вносят 10 мл исследуемого образца. Жидкие среды плотно закрывают и инкубируют в течение 20-21 дней при 37°С.

Каждый 2-4, 6-8, 13-15 и 19-21 день после посева в жидкую среду Фриза (Кат.№ 146180) образцы пересевают на чашки со средой Фриза и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 37° C в течение 14 дней, за исключением последнего образца (19-21 дней), который инкубируют в течение 7 дней.

Пробы проверяют каждые 2-3 дня и пересевают, если происходит изменение цвета среды (с красного на желтый или фиолетовый).

Необходимо проводить положительный и отрицательный контроль.
Согласно рекомендациям EP агаризованные среды просматривают на наличие типичных колоний микоплазм.

Примечание
Не все штаммы микоплазм показывают типичный рост колоний с краем как у жаренной яичницы.

После пересева образцы с желтым или пурпурным цветом среды могут показать отрицательные результаты, поскольку микоплазмы чувствительны к кислой и щелочной среде.

Согласно Европейской фармакопеи образец соответствует, если на агаризованной среде отсутствуют микоплазмы.