Инструкция - Бульон Фриза (FRIIS Broth)

FRIIS Broth – Бульон Фриза, Кат.№ 146180.0001

 Бульон Фриза (FRIIS Broth) используют для выявления нептичьих микоплазм в образцах фармацевтической продукции, особенно при производстве вакцин, в культурах клеток и культурах вирусов.

Состав среды соответствует рекомендациям Европейской фармакопеи (EP, 2.6.7).

Упаковка
Флакон с закручивающейся крышкой, 100 мл среды, 1 шт/уп

Принцип действия
Бульон Фриза содержит лошадиную и свиную сыворотки для обеспечения усвояемого холестерина и жирных кислот. Благодаря индикатору феноловому красному среда меняет цвет с красного на желтый или фиолетовый при наличии микоплазм. Бацитрацин ингибирует синтез клеточной стенки сопутствующих грамположительных бактерий.

Состав среды (г/л)
Дрожжевой экстракт – 5,57, лошадиная сыворотка – 100, свиная сыворотка – 100, бульон с сердечной вытяжкой – 2,05, PPLO-бульон – 4,5, феноловый красный - 0,014, Na₂HPO₄ – 0,036, KH₂PO4 – 0,029, MgSO₄ – 0,049, CaCl₂ – 0,068, NaCl – 3,9, KCl – 0,194, MgCl₂ – 0,049, бацитрацин – 0,152.

Исходная среда прозрачная, красного цвета; рН среды 7,2-7,6. 

Ход анализа
M. synoviae не растет на бульоне Фриза, поскольку для роста необходим NAD. 
M. hyorhinis ATCC 29052 требовательный штамм к условиям роста, не растет на агаре Фриза.

Тест-штаммы показывают хороший рост на бульоне Фриза:

- A. laidlawii (NCTC 10116)
- M. fermentans (NCTC 10117)
- M. gallisepticum (NCTC 10115)
- M. hyorhinis (NCTC 10130)
- M. orale (NCTC 10112)
- M. pneumoniae (NCTC 10119)

Согласно рекомендациям Европейской фармакопеи в 100 мл бульона Фриза вносят 10 мл исследуемого образца. Жидкие среды плотно закрывают и инкубируют в течение 20-21 дней при 37°С. Пробы проверяют каждые 2-3 дня и пересевают, если происходит изменение цвета среды (с красного на желтый или фиолетовый).

На каждый 2-4, 6-8, 13-15 и 19-21 день после посева в жидкую среду образцы пересевают на чашки с агаром Фриза (Кат.№ 146007)и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 37°C в течение 14 дней, за исключением последнего образца (19-21 дней), который инкубируют в течение 7 дней.

Кроме того, 0,2 мл засевают на агар Фриза, инкубируют не менее 14 дней в микроаэрофильных условиях (5-10% CO2) при достаточной влажности при 37°C.

Необходимо проводить положительный и отрицательный контроль.
Согласно рекомендациям EP, агаризованные среды просматривают на наличие типичных колоний микоплазм.

Примечание
После пересева образцы с желтым или пурпурным цветом среды могут показать отрицательные результаты, поскольку микоплазмы чувствительны к кислой и щелочной среде.

Согласно Европейской фармакопеи образец соответствует, если на агаризованной среде отсутствуют микоплазмы.