104148 Singlepath-L’mono - Экспресс-тест на Listeria monocytogenes

Экспресс-тесты Singlepath-L.mono производства фирмы Merck (Германия) предназначены для выявления Listeria monocytogenes. Определение Listeria monocytogenes с помощью Singlepath-тестов основано на методе визуальной иммунохроматографии (разновидность иммуноферментного анализа).

Тест представляет собой диагностическую панель с лункой для добавления обогащенного образца, контрольной (С) и тестовой (Т) зоной. Антигены определяемых бактерий, присутствующие в образце, взаимодействуют с меченными золотом антителами, включенными в состав теста, с образованием окрашенного комплекса антиген-антитело. Окрашенный комплекс связывается с иммобилизованными антителами с образованием линий в тестовом и контрольном окнах.

Схема выявления Listeria monocytogenes:

• Предварительное селективное обогащение на среде Фразера (половинной концентрации) или среде UVM. (25г образца + 225мл среды) при 30^оС, 21-24ч.
• Селективное обогащение на среде Фразера или среде UVM-II. 0,1мл культуральной жидкости к 9,9 мл среды. Инкубация при 37^оС, 21-24ч.
• Singlepath-тест. Добавить 180мкл культуральной жидкости. Учесть результаты через 20 мин - визуальное определение наличия линий в тестовой и контрольной зоне теста.
• Подтверждение. Высев положительных результатов на хромогенный агар Chromocult Listeria Selective Agar.

Преимущества:

1. Экспрессность. Результат через 20 минут.
2. Надежность. Высокая чувствительность и специфичность  метода (99%). Ясный и четкий положительный или отрицательный результат. Встроенный положительный контроль.
3. Легко использовать. Нет необходимости в ходе исследо­вания добавлять какие-либо реагенты. Все компоненты включены в одну тест-пластинку. Отсутствуют сложные этапы в исследовании. Одноэтапный формат теста исключает возможные ошибки.
4. Удобный. Необходимо добавить образец и учесть результат.
5. Экономичный. Сокращает время исследования, снижает трудозатраты, уменьшает количество пересевов.
6. Нет необходимости приобретать и обслуживать дорогостоящее оборудование.

Singlepath-L.mono одобрен ФГУЗ Центром Гигиены и Эпидемиологии Роспотребнадзора (МР №24ФЦ/976) и разрешен к применению в лабораториях санитарно-эпидемиологической службы, осуществляющих государственный и ведомственный контроль, а также в производственных лабораториях.

Singlepath-L.mono – это высокочувствительный, специфичный, удобный и надежный тест, используемый для скрининга Listeria monocytogenes в продуктах питания и окружающей среде.

Экспресс-тест для определения Listeria monocytogenes – Singlepath^®-L’mono

Кат.№1.04148.0001
Упаковка - 25 тестов

Singlepath^®-L.’mono – экспресс-тест для выявления и подтверждения Listeria monocytogenes в пищевых продуктах. 

Введение
Листерии - грамположительные, неспорообразующие бактерии. Из 6 видов, относящихся к роду листерий (Listeria spp.), Listeria monocytogenes занимает особое положение, поскольку является патогенной для человека и животных. L.ivanovii патогенна только для животных. Остальные виды листерий – L.innocua, L.seeligeri, L.grayi и L.welshimeri непатогенны для человека и животных.

Листериоз – заболевание, вызываемое L.monocytogenes, может вызывать сепсис, менингиты или даже энцефалиты. Поскольку L.monocytogenes способна преодолевать плацентарный барьер, то листериоз у беременных женщин угрожает жизни плода. L.monocytogenes также ответственна за заболевания у групп людей с пониженным иммунитетом (дети, пожилые люди). Листерии представляют серьезную угрозу  загрязнения пищевых продуктов, поскольку они широко распространены в окружающей среде и могут расти даже при пониженных температурах в холодильнике (+2 - +8^оС).

Необходимо уметь быстро и надежно выявлять наличие листерий в образцах пищевых продуктов и сырье. Метод выявления листерий с использованием экспресс-теста Singlepath^®-L’mono позволяет дать ответ уже через 30 минут после этапа селективного обогащения.

Принцип действия
Экспресс-тест Singlepath^® L.‘mono – иммунохроматографический тест на основе меченных золотом антител. Тест Singlepath^®- L.‘mono представляет собой диагностическую тест-панель с круглой лункой для добавления образца, овальным окном с тестовой (Т) и контрольной (С) зонами.

1) Образец добавляется в круглую лунку.
2) Образец адсорбируется подложкой и взаимодействует со специфичными к L.monocytogenes мечеными антителами.
3) В присутствии антигена L.monocytogenes образуется антиген-антитело меченый комплекс, который мигрирует до зоны связывания в тестовой зоне (Т).
4) Зона связывания содержит антитела к комплексу антиген-антитело. В результате образуется четкая красная линия.
5) Оставшийся образец продолжает движение к контрольной зоне (С) и образуют четкую красную линию, указывающую на то, что тест работает правильно.

Чувствительность метода - 1 клетка (КОЕ) L.monocytogenes в 25 г образца или 5х10⁶ кл/мл или 1 колония L.monocytogenes на чашке с агаром

Ограничения метода
1) Интенсивность окраски зависит от концентрации клеток L.monocytogenes
2) На результат не влияет наличие сопутствующих микроорганизмов 

Условия хранения
Singlepath^® L.‘mono стабилен до даты, указанной на упаковке при хранении в условиях +2-8^оС. 

Выявление L.monocytogenes в образцах пищевых продуктов
1) Смешать 25 г (мл) образца с 225 мл среды UVM или среды Фразера  половинной концентрации, при необходимости гомогенизировать образец. Инкубировать в течение 18-24 ч при 30^оС или при 37^оС.
2) Перенести 0,1 мл образца к 10 мл среды UVM-II или бульона Фразера. Инкубировать 21-44 ч при 28-30^оС или при 37^оС.
3) Дать остыть до комнатной температуры.

Singlepath-тестирование
1) Перед использованием обогащенный образец и тест Singlepath^®- L.‘mono должны быть комнатной температуры (обычно тесты хранятся в холодильнике).
2) Вскрыть пакет из фольги, в который упакован Singlepath^® тест. Положить Singlepath^® тест на ровную поверхность и отмаркировать (указать номер исследуемого образца). Тестирование должно быть проведено в течение 2 часов после вскрытия фольги!
3) Используя микропипетку и одноразовый наконечник, добавить 150 мкл культуральной жидкости в круглую лунку для образца.
4) Считать результаты через 30 минут после добавления образца.

Интерпретация результатов
1) Результаты теста учитываются только при наличии четкой красной линии в контрольной зоне (С) через 30 минут.
2) Образец считается положительным, если после 30 минут или ранее красные линии образовались как в тестовой (Т), так и в контрольной (С) зоне.
3) Образец считается отрицательным, если красная линия отсутствует в тестовой зоне (Т), но присутствует в контрольной зоне (С).
4) Тест следует повторить, если красные линии отсутствуют как в тестовой, так и в контрольной зоне через 30 минут.  

Положительный результат, полученный иммуноферментным методом, с использованием теста Singlepath^®-L’mono является предварительным и должен быть подтвержден посевом на дифференциально-диагностические среды в соответствии с ГОСТ Р 51921 или МУК 4.2.1122. Выделенную чистую культуру в дальнейшем необходимо подтвердить биохимическими и серологическими методами.

Подтверждение колоний L.monocytogenes с агаризованных сред
Тест Singlepath^® L.‘mono может быть использован для подтверждения характерных колоний L.monocytogenes, выросших на хромогенном агаре (Chromocult Listeria Agar), ПАЛКАМ-агаре (PALCAM agar) или Оксфорд агаре (OXFORD agar).

1) Выбрать 1-3 характерные колонии L.monocytogenes
2) Ресуспендировать колонии в 250 мкл бульона с сердечно-мозговой вытяжкой (BHI broth) или бульоне Фразера или в триптиказо-соевом бульоне (CASO broth)
3) Инкубировать в течение 1 часа при 37^оС
4) Дать остыть до комнатной температуры.

Singlepath-тестирование 
1) Перед использованием обогащенный образец и тест Singlepath^®- L.‘mono должны быть комнатной температуры (обычно тесты хранятся в холодильнике).
2) Вскрыть пакет из фольги, в который упакован Singlepath^® тест. Положить Singlepath^® тест на ровную поверхность и отмаркировать (указать номер исследуемого образца). Тестирование должно быть проведено в течение 2 часов после вскрытия фольги!
3) Используя микропипетку и одноразовый наконечник, добавить 150 мкл культуральной жидкости в круглую лунку для образца.
4) Считать результаты через 30 минут после добавления образца.

Интерпретация результатов
1) Результаты теста учитываются только при наличии четкой красной линии в контрольной зоне (С) через 30 минут.
2) Образец считается положительным, если после 30 минут или ранее красные линии образовались как в тестовой (Т), так и в контрольной (С) зоне.
3) Образец считается отрицательным, если красная линия отсутствует в тестовой зоне (Т), но присутствует в контрольной зоне (С).
4) Тест следует повторить, если красные линии отсутствуют как в тестовой, так и в контрольной зоне через 30 минут.