Основа железо-сульфитного агара – Sulfite iron agar base for microbiology
Кат.№110864.0500, упаковка – 500 г
Для обнаружения и подсчета клостридий в мясе и мясных продуктах. Среда согласуется с рекомендациями ИСО (1971).
Принцип действия
Прогревание образцов мяса при 80°С в течение 1 мин убивает вегетативные клетки присутствующих в нем бактерий, но споры выживают и сохраняют способность к прорастанию. Бактерии, образующие сероводород, восстанавливают сульфит, присутствующий в среде, до сульфида, который реагирует с ионами железа с образованием сульфида железа черного цвета. Колонии таких штаммов окрашиваются в черный цвет; колонии слабо синтезирующих сероводород - в коричневый. В анаэробных условиях клостридии на средах с ионами железа образуют колонии черного цвета.
Состав (г/л)
Казеиновый пептон 15,0; дрожжевой экстракт 10,0; сульфит натрия 0,5; агар-агар 15,0.
Необходимо добавить сульфит железа (II) 1,4.
Приготовление
Растворить 40,5 г среды в 1 литре дистиллированной воды, дать среде набухнуть в течение 20-30 минут, разделить на малые объемы. Автоклавировать 15 мин при 121°С;
Охладить среду до 50°С, добавить 20 мл/л 7% раствора сульфита железа (II), перемешать, разлить в чашки.
рН 6,9±0,2 при 25°С. Среда прозрачная, от желтоватого до желтовато-зеленого цвета.
Проведение анализа
Приготовление образца: в соответствии с рекомендациями ИСО измельченный материал гомогенизирует с девятикратным по его весу количеством стерильного раствора (пептон из казеина 0,1 %, цистеин-хлорид 0,05 %, хлористый натрий 0,85 %). Переносят 50 мл в колбу вместимостью 100 мл и прогревают 1 мин при 80°С на водяной бане. Затем быстро охлаждают холодной водой. Материал наносят на две чашки с сульфит-железным агаром и инкубируют: одну чашку аэробно, другую анаэробно - до двух суток при 30°С. Считают, что мезофильные клостридии присутствуют, если: а) черные колонии образуются только в анаэробных условиях, б) проба на каталазу с реагентом Bactident®-Catalase - отрицательна. Если образуется газ, культура считается каталазоположительной. Если газообразования нет, культура каталазотрицательна.
Следует учесть, что для образования колоний в чашках Петри поверх среды необходимо нанести еще один слой и инкубировать посев в анаэробных условиях. Посев в пробирках с наслоением можно инкубировать аэробно.
Тест-штаммы |
Рост |
Черные колонии |
Clostridium perfringens ATCC 10543 |
очень хороший |
+ |
Clostridium perfringens ATCC 13124 |
очень хороший |
+ |
Clostridium botulinum |
очень хороший |
+ |
Escherichia coli ATCC 25922 |
средний |
- |
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 |
слабый / средний |
- |
Bacillus cereus ATCC 11778 |
слабый / хороший |
- |
Bacillus cereus ATCC 11778 |
Clostridium botulinum |
Clostridium perfringens ATCC 13124 |
Clostridium tetani ATCC 19406 |