Энтерококки

Chromocult Enterococci Broth (Enterococcus faecalis)

Энтерококки (Enterococcus)
Энтерококки (Enterococcus) – это род бактерий семейства Enterococcaceae (выделенный в 1984 г. из рода стрептококков), относится к порядку Lactobacillales, подклассу лактобактерий, классу Bacilli. Энтерококки – санитарно-показательные условно-патогенные микроорганизмы. Факторы патогенности вирулентных штаммов – компоненты клеточной стенки, ферменты агрессии и токсины. Их клетки часто представлены парами (диплококки) или короткими цепочками. По физиологическим характеристикам они очень близки к стрептококкам. Основными симбионтами микрофлоры кишечника человека являются два вида энтерококков: E. faecalis (90–95 %) и E. faecium (5–10 %). Их патогенные штаммы вызывают многие заболевания, такие как: инфекция мочевыводящих путей, нагноение ран, бактериемия, дивертикулит, менингит, бактериальный эндокардит. 

Энтерококки – комменсалы кишечника кур и индеек. В то же время, энтерококкоз – одна из самых распространенных бактериальных инфекций промышленной птицы (36% от всех бактериозов). Наиболее важной особенностью энтерококков является высокий уровень их эндемической антибиотикорезистентности. Некоторые штаммы имеют внутренние механизмы устойчивости к беталактамным (пенициллины, цефалоспорины) и ко многим  аминогликозидным антибиотикам. В последние два десятилетия в США, других развитых странах появились особо вирулентные штаммы энтерококков, резистентные к ванкомицину (vancomycin-resistant enterococcus = VRE). Они способны вызывать внутрибольничные инфекции. 

В ряде стран (США) содержание энтерококков в морской воде строго нормируется: предельно допустимый уровень составляет 7 КОЕ/100 мл воды. Содержание энтерококков нормируется также в мясе, рыбе и их продуктах. Энтерококки используются как санитарно-показательные микроорганизмы для оценки микробиологической чистоты пищевых продуктов. По их количеству судят о степени фекального загрязнения пищевого продукта или воды.

Esculin Azide agar (Enterococcus faecalis)

Распространение и патогенность
Род Enterococcus относится к факультативно-анаэробным аспорогенным хемоорганотрофным грамположительным бактериям. Он насчитывает около 20 экологически значимых видов, широко распространенных в природе. Эти бактерии – консорбенты кишечника теплокровных: человека, млекопитающих, птиц. Длительно выживают в почве и пищевых продуктах, в которых могут размножаться при комнатной температуре.

В ослабленном организме энтерококки способны вызывать заболевания самых различных органов и систем. Основное значение в патологии человека имеет вид E. faecalis. Он может быть причиной сепсиса, различных форм внутрибольничных инфекций, воспалительных заболеваний мочеполовых, респираторных, желчных пищеварительных путей и органов, кожи и подкожной клетчатки, полостей глотки, рта, носа, носовых пазух, уха и др. Доказана роль энтерококков при патологических процессах в брюшной полости, мочевых путях, при эндокардитах, холециститах, панкреатитах и др. 

Существует мнение, что энтерококки способны вызывать пищевые токсикоинфекции. Однако употребление в пищу продуктов, при изготовлении которых применяется культура энтерококков для придания им своеобразного вкуса и аромата (например, сыр «чеддер»), не вызывает патологических явлений. Только некоторые, отдельные штаммы энтерококков способны вызывать пищевые отравления при массивном обсеменении пищевого продукта. 

Штамм Enterococcus faecalis Г-35-4/62 (в составе пробиотика окарин) используется в ветеринарной практике. Он обладает высокой антагонистической активностью в отношении патогенных микроорганизмов. Характеризуется отсутствием  токсигенности и генов антибиотикорезистентности, не угнетает нормальную бактериальную микрофлору кишечника – лактобацилл, бифидобактерий, кишечных палочек. Нетоксигенный штамм Enterococcus faecium SF68 является основой противодиарейных лекарств, таких как линекс и бифиформ. 

Морфологические особенности клеток и колоний
Клетки энтерококков полиморфны, но преимущественно овальные (размером 0,6–2,0 х 0,6–2,5 мкм), спор не образуют. В мазках из сахарных сред имеют круглую, овальную или ланцетовидную формы, располагаются парами, небольшими скоплениями, реже – короткими цепочками. Большинство видов энтерококков неподвижны, некоторые ограниченно подвижны (имеют небольшие жгутики), иногда синтезируют капсулу. Хорошо растут на простых и селективных средах, выдерживают до 6,5 % NaCl. На жидких средах дают диффузный рост, на плотных образуют мелкие (0,4-1 мм), округлые, выпуклые блестящие колонии, иногда в виде нежного налета. В средах с молоком, кровью, сывороткой формируют водонерастворимый пигмент белого или лимонно-желтого цвета.  

Chromocult Enterococci Agar (Enterococcus faecalis)

Физиолого-биохимическая характеристика, культуральные свойства
Энтерококки – факультативные анаэробы. За счет энергии брожения способны жить как при высокой, так и при низкой концентрации  кислорода. Диапазон температур для роста от 10 до 45°С, оптимальная температура – 35-37°С. В процессе брожения ферментируют разнообразные углеводы с образованием, в основном, молочной кислоты, но не газа. Каталаза-отрицательны, в редких случаях восстанавливают нитраты. Высоко резистентны к различным факторам внешней среды (выдерживают нагревание до 60°С в течение 30 минут), дезинфицирующим средствам, длительное время сохраняют жизнеспособность на предметах домашнего обихода. Устойчивы к высушиванию, действию света, низкой температуре. Все антибиотики (даже последних поколений!) действуют на энтерококки только бактериостатически. По антигенной структуре (классификация Лэнсфилда) относятся к серологической группе D. 

Источники и факторы передачи инфекции
Энтерококки входят в состав микрофлоры ротовой полости, кишечника и мочеполовой системы взрослых людей; Enterococcus faecium выделяют из испражнений у 25% клинически здоровых лиц. Аналогично источником энтерококковой инфекции может быть промышленная птица. Поскольку по устойчивости в объектах внешней среды энтерококки близки к стафилококкам, в санитарной микробиологии их используют в качестве санитарно-показательных микроорганизмов. 

Эпидемиология и патогенез
Эти характеристики энтерококков аналогичны таковым стрептококковых инфекций. Клиническая картина заболеваний – бактериальные эндокардиты, энтериты, колиты, бактериемия, хронический обструктивный бронхит, раневые инфекции, септицемии. Гемолизирующие энтерококки способны вызывать пищевые отравления и дисбактериозы кишечника. В патологии человека наибольшую роль играют Enterococcus faecalis, E. faecium, Е. durans. После приема инфицированной пищи внешние признаки энтерококковых токсикозов у людей обычно проявляется сравнительно быстро (через 2-6 ч.). Они сопровождается головной болью, головокружением, общей слабостью, тошнотой, рвотой с судорожными позывами, поносом. Выздоровление обычно наступает через 1-3 суток. Смертельных случаев почти не отмечено. Симптоматика токсикозов зависит от характера токсинов, выделяемых кокковой микрофлорой. 

Методы выявления, диагностика
Определением энтерококков как санитарно-показательных микроорганизмов пользуются при оценке санитарного состояния объектов внешней среды – питьевой воды, сточных вод. Ряд исследователей считает энтерококк более чувствительным показателем фекального загрязнения, чем кишечную палочку, поскольку энтерококк практически не размножается вне организма человека или животного. Метод определения энтерококков включен ВОЗ в Международный и Европейский стандарты исследования питьевой воды.

В последнее время предложено проводить мониторинг энтерококковой инфекции в популяциях промышленной птицы. Для оценки патогенных свойств энтерококков, выделенных из патологического материала птиц, рекомендованы куриные эмбрионы. Вирулентные штаммы энтерококков E. faecalis и E. faecium вызывают гибель куриных эмбрионов в течение трех суток с момента заражения. 

Классический метод
- 101590 Azide dextrose broth (Азидно-глюкозный бульон)
- 105262 Selective agar Slanetz & Bartley (Селективный агар по Сланецу и Бертли)
- 105222 Esculin Azide agar (Канамицин эскулин азид агар)

Стандартный метод определения энтерококков (E. faecalis, E. faecium, E. avium, E. gallinarum) основан на высеве определенного количества продукта или его разведения в жидкую селективную среду или на поверхность плотной селективной среды, аэробном культивировании посевов при 37±1^оС в течение 24-48 ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к энтерококкам, пересчете их количества на 1 г (1 см^з) продукта. 

Альтернативные (ускоренные) методы
- 110294 Enterococci broth (Хромогенный бульон на энтерококки)
- 100950 Chromocult Enterococci agar (Хромогенный агар на энтерококки) 

Нормативная документация

- ГОСТ 28566-90 Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества энтерококков.