Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes

ГОСТ 32031-2012 Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes  соответствует международному стандарту ISO 11290-1:1996 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes - Part 1: Detection method (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения и подсчета микроорганизмов Listeria monocytogenes). Межгосударственный стандарт ГОСТ 32031-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г. Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы выявления бактерий Listeria monocytogenes.

Сущность метода
1. Первичное обогащение анализируемой пробы проводят в жидкой среде со сниженной концентрацией селективных компонентов (полуконцентрированный бульон Фразера или среда UVM) при температуре 30С в течение 24 ч. Бактерии рода Listeria могут находиться в небольшом количестве в продукте на фоне значительного количества микроорганизмов других родов. Поэтому для выявления небольшого количества бактерий рода Listeria, а так же «поврежденных» клеток в пробе необходим этап селективного обогащения на среде с пониженной концентрацией селективных компонентов.

2. Вторичное обогащение посевного материала проводят в жидкой среде с полной концентрацией селективных компонентов (бульон Фразера или среда UVM II) при температуре 37С в течение 48 ч.

3. Пересев посевного материала проводят параллельно на две плотные селективные среды:
а) первая среда (обязательная): ALOA-агар;
б) вторая среда: одна из плотных селективных сред, на выбор (Оксфорд агар, Палкам агар или ПАЛ).
Посевы на ALOA-агар культивируют при температуре 37С и просматривают через 24 ч, а при необходимости еще через 24 ч, контролируя наличие роста характерных для L. monocytogenes колоний.

4. Колонии с характерным ростом для Listeria monocytogenes пересевают на плотные питательные среды и культивируют при температуре 37С в течение 24 ч; в дальнейшем проводят их идентификацию по соответствующим биохимическим признакам.

Информация для заказа:

Среда Фразера 1/2:
102249 ReadyBag Half Fraser Broth with supplements ISO 11290 - Среда Фразера половинной концентрации с добавками.
Готовая стерильная среда, ее не надо взвешивать, не надо автоклавировать, не надо вносить добавки. Срок годности - 3 года.

Среда Фразера:
110398 FRASER Broth Base ISO 11290 - Основа бульона Фразера
100093 FRASER Listeria Selective selective supplement – Селективная добавка к среде Фразера
100092 Fraser Listeria Ammonium iron (III) Supplement - Добавка аммонийного железа к среде Фразера

Среда UVM:
110824 UVM-Listeria selective enrichment broth - Селективный бульон для первичного обогащения листерий; включает селективные добавки
104039 UVM II supplement - Селективная добавка для второго этапа накопления листерий

ALOA агар (обязательная среда):
100427 Chromocult Listeria selective agar base acc. Ottaviani and Agosti (ALOA agar) (ISO_11290) – Хромогенный агар (основа) листерий
100432 Chromocult Listeria agar selective supplement – Селективная добавка к хромогенному агару
100439 Chromocult Listeria agar enrichment supplement – Обогатительная добавка к хромогенному агару

Дополнительные среды:
PALCAM агар:
111755 PALCAM Listeria selective agar base - Основа среды ПАЛКАМ для листерий
112122 PALCAM Listeria Selective-Supplement - Добавка к среде ПАЛКАМ

OXFORD агар:
107004 Oxford agar - Оксфорд агар (основа)
107006 Oxford Listeria selective supplement - Добавка для Оксфордского агара

Идентификация
104148 Singlepath L’mono - Экспресс-тест (20 мин) на Listeria monocytogenes